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IgM 類小鼠單克隆抗體純化試劑盒使用說明書

試劑特點:
本試劑盒特點在于純化操作的簡單化、所得抗體保持高活性和較高純度。實
驗表明,本試劑盒可以得到 90%以上純度的抗體;并且由于配方考究,抗體
在純化過程中幾乎沒有損傷,完全保持應有的活性;實際應用極好。 適用范圍:
本試劑盒適用于小鼠 IgM 類單克隆抗體腹水的純化,不能用于 IgG 和 IgA 類
單克隆抗體腹水的純化實驗,如需要可選擇本公司其它貨號的純化試劑,它
能為您帶來良好的結果。 試劑組成:
試劑名稱 數量 試劑名稱 數量
純化液 A 50ml 純化液 E 5ML
純化液 B 50mL 透析試劑(粘稠或固體) 配 8L 量
純化液 C 50mL 透析袋 4 份
純化液 D 50mL 說明書 1 份
純化步驟:
1、從冰箱中取出試劑盒放置室溫恢復溫度 30 分,期間可將單克隆
抗體腹水從冰箱中取出,室溫避光復溫 15 分鐘,隨后用自來水
邊沖邊搖勻快速解凍。
2、將化開的單克隆抗體腹水 8000-12000RPM 室溫 離心 10 分鐘。
3、先吸棄*上面浮沫和油脂,然后將上清轉出到另一個干凈容器或
離心管;按每 1 毫升單克隆抗體腹水加入純化液 A(加前確定沒
有試劑析出,如有析出搖晃溶解即可) 1 毫升(必須**),室
溫避光倒轉 30 分。
4、8000RPM 室溫離心 10-20 分鐘,沉淀用純化液 B 溶解到原單克隆
抗體腹水 1/2 體積,再按此體積每 1 毫升加入純化液 C (加前確
定沒有試劑析出,如有析出搖晃溶解即可)1 毫升((必須**),
室溫避光倒轉 10 分鐘。
5、8000RPM 室溫離心 10-20 分鐘,棄沉淀收集上清;每 1 毫升上
清液加純化液 D(加前確定沒有試劑析出,如有析出搖晃溶解即
可) 1 毫升(必須**),室溫避光倒轉 20 分鐘。
6、8000RPM 室溫離心 10-20 分鐘,收集沉淀用純化液 B 收集溶解沉
淀到原單克隆抗體腹水體積的 1/3。透析袋用純水浸泡 5 分鐘,
然后用手揉捏數次,接純水沖洗干凈,抗體放入扎好。透析液用
純水溶解透析試劑到 8L(也可先溶解到 400ML,用時 20X 稀釋),
將要透析的抗體袋子放入。抗體體積:透析液體積=1:100,4℃
透析過夜。收集透析后抗體。
7、以透析后抗體體積:純化液 E 的體積=9:1 的比例加入純化液 E
搖勻(也就是 9 體積抗體加 1 體積純化液 E),靜置 5min。8000RPM
室溫離心 10 分鐘,棄沉淀收集上清即為純化好的抗體。
8、將純化好的抗體放入用透析夾或繩扎緊。抗體體積:透析液體積
=1:50 以上;4℃透析,中間換液三次,透析總時間不超過 24 小
時。然后 8000RPM 室溫離心 10 分鐘,收集上清測蛋白濃度并調
控在 5mg/ml 左右*后加 10/萬 NaN3 防腐并**過濾-20℃備用。 注意事項:
1、溶血嚴重和腐敗的腹水不得用于純化。
2、離心溫度不要超過 37℃。
3、操作和量取試劑要細致精準,否則影響純度。
4、不攪拌透析每次靜置透析時間不得低于 4 小時。
5、如覺得透析太慢可以選擇超濾管。
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